На главную страницу
Разделы Поиск Карта Доступ к платным услугам Для контакта Russian English Закрыть меню Рыбный атлас Мониторинг Академия Эксперт Офис Торговая система Информация Интернет-ресурсы Услуги комплекса Развлечения Участники комплекса
InterNevod Banners Network


К ВОПРОСУ О ПОЛУЧЕНИИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ПИЩЕВОЙ ДОБАВКИ НА ОСНОВЕ РЫБНОГО ЖИРА И ФОСФОЛИПИДОВ ИЗ МОРСКОЙ КАМБАЛЫ

Лебская Т.К., Шаповалова Л.А. (Полярный научно-исследовательский институт морского рыбного хозяйства и океанографии им.Н.М.Книповича)

Введение

Расшифровка механизма действия и особенностей биотрансформации многих природных соединений, а также новые технологии получения их эффективных форм, послужили предпосылками к созданию биологически активных пищевых добавок.

Одним из приоритетных направлений в этой области является использование природных соединений из морских гидробионтов, которые содержат уникальный набор биологически активных соединений (Гурин, Ажгихин,1981; Акулин, Леванидов, 1985; Лебская и др., 1993; Лебская, 1997; Лебская и др.,1998; Акулин, Блинов,1995; Тутельян, 1996; Блинов, Шульгина, 2000; Поздняковский, Австриевских, 2000; Лебская и др., 2000;Тутельян, Васильев, 2000; Fusetani,1990;1994; и др.).

Рыбный жир и фосфолипиды давно известны как продукты с широким спектром лечебного и профилактического действия (Ржавская, 1976; Левачев, 1988; Болотова и др., 1988; Боева и др., 1994; Подобед и др., 1995;). Предполагается, что сочетание этих продуктов в форме композиции, будет способствовать повышению терапевтического эффекта.

Вследствии того, что рыбный жир представляет собой жидкую субстанцию, а фосфолипиды √ вязкую массу, при обычных условиях эти два вещества не смешиваются и не образуют однородную консистенцию.

Известны способы получения БАД на основе рыбного жира и жировых, спиртовых экстрактов из облепихи, боярышника и других растений (Рамбеза, Байдалинова,1996; Пат. РФ N2129809; Маслова, Сподобина, 2000). Очевидно, для получения однородного состава рыбного жира с фосфолипидами, целесообразно последние перевести в спирторастворимую форму и затем растворить в рыбном жире (Лебская и др.,1999). Однако, сведения о температурных условиях, соотношении масс продукта и растворителя, а также времени насыщения спирта фосфолипидами чрезвычайно ограничены.

Цель настоящих исследований заключалась в определении оптимальных условий перевода фосфолипидов в спирторастворимую форму с последующим обогащением ею рыбного жира.

Материал и методы исследования

Материалом для исследований служил фосфолипидный концентрат (ФК), выделенный из преднерестовых гонад морской камбалы Hippoglossoides platessoides по разработанному нами способу (Пат. РФ N2063242).

Фракционный состав липидов изучали методом тонкослойной хроматографии. Для хроматографии общих липидов использовали систему гексан : серный эфир : ледяная уксусная кислота при соотношении 9 : 2 : 0,1, для фосфолипидов √ спирт бутиловый : спирт этиловый:вода при соотношении 5:1:4, соответственно (Кейтс, 1975; Кирхнер, 1981). Идентификацию липидных фракций осуществляли с помощью стандартов фирмы Sigma, количественное их содержание определяли на сканере CS-9000 фирмы Shimadzu Corp. (Япония).

Растворимость фосфолипидов в этиловом спирте определяли по наивысшей степени их извлечения из фосфолипидного концентрата по оптической плотности спиртовых экстрактов. Оптическую плотность спиртовых экстрактов измеряли на спектрофотометре UV-3101 фирмы "Shimadzu Corp" (Япония) в кварцевых кюветах с длиной оптического пути 10 мм в диапозоне длин волн 190-240 нм. Настаивание проводили в закрытых емкостях (колбы с притертой пробкой), при периодическом перемешивании. Пробы для анализа отбирали строго одного и того же объема, измерения на приборе осуществляли в идентичных условиях.

Вследствии того, что точную концентрацию спирторастворимых фосфолипидов определить достаточно трудно, оценку ее проводили по условной концентрации (С*), соответствующей оптическому поглощению суммы фосфолипидов (а также примесей жирового характера), растворившихся в спирте из 1 г исходного фосфолипидного концентрата:

С*=DV6250/m1000, где

D - оптическая плотность раствора в максимуме поглощения, ед. опт. плот.;
V - общий объем спирта, мл;
m - масса навески фосфолипидного концентрата, г;
6250- коэффициент, учитывающий разведение.

Растворимость фосфатидов исследовали в зависимости от соотношения фосфолипидный концентрат: спирт (весовая часть концентрата:объемная часть растворателя), а также от времени и температуры настаивания. При соотношении концентрат:спирт 1:3, 1:5, 1:7 и 1:10 настаиваение проводили при температуре 20-22 °С 5 часов, измеряя показания оптической плотности через каждые 30 минут, а при температуре 44-45 °С показания снимали через 15 минут в течении первого часа и через 30 минут - до окончания экспозиции при соотношении сырье:растворитель 1:5 и 1:7. После аппроксимирования экспериментальных данных были построены полиномиальные кривые, характеризующие функцию D=f(t).

Результаты и обсуждение

Фракционный состав фосфолипидного концентрата из преднерестовых гонад Hippoglossoides platessoides характеризуется 74% содержанием фосфолипидов, доминирующая часть которых в количестве 44% представлена фосфатидилхолином (табл.).

Tаблица
Фракционный состав липидов фосфолипидного концентрата и спиртового его экстракта

Наименование пробы фл* ст* другие фракции
Фосфолипидный концентрат 74,20 16,11 9,70
Спиртовый экстракт фосфолипидного концентрата 61,7 27,7 10,60

фл* - фосфолипиды, ст* - стерины.

Другие фракции липидов представлены минорными значениями диглицеридов (0,3-0,7 %), свободными жирными кослотами(1,4-2,9 %), триглицеридами(0,6-1,0 %), эфирами стеринов(2,2-3,0 %) и неидентифицированными соединениями.

Оптическая плотность в максимуме поглощения спиртовых экстрактов фосфолипидов, находящейся в интервале длин волн 198,25-199,35 нм, достигала максимальных значений при соотношениии фосфолипидного концентрата и спирта 1:3 и температуре 20-22 °С, а наименьшие значения - при соотношении 1:10 (температура 20 -22 °С).

Полиномиальные кривые зависимости концентрации фосфолипидов в спирте от соотношения массы фосфолипидного концентрата и объема растворителя при разной продолжительности и температуре настаивания имели по одному максимуму в диапозоне времени настаивания 2,5 - 3,5 часа (рис.). Причем, с увеличением количества растворителя по отношению к массе исходного фосфолипидного концентрата возрастала концентрация спирторастворимых фракций, достигая наивысшего значения при соотношении 1:10. Увеличение температуры настаивания до 44-45 °С практически не оказывает влияние на процесс растворения фосфолипидов в спирте при соотношении концентрата и растворителя 1:5, так как обе кривые зависимости практически совпадают (на рис. Poly(1:5) и Poly(1:5(44°С)). При соотношении 1:7 температурный фактор играет существенную роль, значительно увеличивая концентрацию спирторастворимых фосфолипидов с возрастанием температуры настаивания (на рис. Poly(1:7) и Poly(1:7(44°С)). В то же время, при растворении фосфолипидного концентрата в подогретом спирте конечная форма его спиртового экстракта характеризуется присутствием значительного количества стеринов(см. табл.).


Рис. Зависимость растворимости фосфолипидов в спирте от соотношения их масс, продолжительности и температуры настаивания

Известно, что фосфолипиды избирательно растворяются в этиловом спирте (Тютюнников, 1974). Увеличение их растворимости в этаноле наблюдается при уменьшении концентрации триглицеридов в жировой смеси. Из глицерофосфатидов в этаноле хорошо растворяются лецитины и фосфатидные кислоты. Этим они отличаются от кефалинов и фосфосеринов, которые в данном растворителе не растворяются. Однако растворимость последних двух фосфолипидов увеличивается при наличии с ними в смеси большого количества лецитина. Сфингомиелины, относящиеся к группе фосфосфингозинов, в этиловом спирте малорастворимы. Стерины, присутствующие в фосфолипидном концентрате, при растворении последнего в спирте, особенно горячем, растворяются легко (Тютюнников, 1974). Наши данные подтверждают эти представления. Поэтому, при растворении фосфолипидного концентрата в подогретом спирте вместе с фосфолипидами в спирторастворимую фракцию переходят и стерины.

Таким образом, из полученых данных можно сделать вывод о целе-сообразности проведения экстракции в течении 3,5 часов при соотношении фос-фолипидный концентрат:спирт 1:10 и температуре 20-22 °С. Альтернативный вариант может быть осуществлен за счет увеличения температуры до 44-45 °С и снижения растворителя до 1:7 по отношению к фосфолипидному концентрату.

Однако, в данных условиях при максимальной экстракции спирторастворимых фракций в конечном продукте увеличивается концентрация нефосфолипидных соединений, в частности, стериновых (см. табл.). Для получения фосфолипидного продукта с преимущественным содержанием фосфатидилхолина, обладающего более высокой биологической активностью, очевидно, необходимо снизить количество этанола по отношению к исходному концентрату до 1:2,5 - 1:3,5 и сократить время настаивания, возможно, за счет увеличения температуры.

Окончательный вывод о выборе оптимальных условий растворения фосфолипидного концентрата в этиловом спирте можно будет сделать после проведения дополнительной серии экспериментов. Полученные выше указанным способом спиртовые экстракты далее упаривали до полного удаления растворителя. Собирали спирторастворимые фосфолипиды и растворяли в этаноле в соотношении 1:1 - 1:1,5 . Спиртовый раствор фосфолипидов, приготовленный вышеуказанным способом, смешивали с рыбным жиром из расчета дневной дозировки для взрослого человека в количестве 1-1,2 г (Орлова, 1998) и получали субстанцию однородной консистенции. Таким образом, получена композиция биологически активных продуктов со следующим содержанием компонентов:

фосфолипиды - 8,3 %
этанол - 6,6-8,3 %
пищевой рыбный жир - 81,7-85,1 %.

Очевидно, состав этого продукта свидетельствует о возможности его отнесения к разряду биологически активных пищевых добавок.

Известно, что фосфолипиды входят в состав биологических мембран и их дефицит в питании сопровождается нарушением барьерной и транспортной функций биологических мембран (Тутельян, 1996; Скулачев, 1999). В связи с этим, в клинической практике в настоящее время в лечебно-профилактических целях используются биологически активные пищевые добавки на основе растительных фосфолипидов. Это масложировые продукты ⌠Витол■, ■Витол-коктейль■, ⌠Витол-холин■, ■Лецитин-холин■, ■Липостабил■, ■Эйконол■ и другие. Показана эффективность применения таких добавок при атеросклерозе для нормализации липидного обмена, инфаркте миокарда для повышения оксигенации тканей и толерантности к стрессам, для стимуляции центральной нервной системы и защиты миелиновых оболочек нервов от разрушений, цирозе печени для препятствия развития жировой дегенерации, улучшения памяти и повышения умственной деятельности (Болотова и др., 1988; Гордиенко, 1990; Горелова и др., 1999; Арчаков и др., 2000; Ашмарин, Исаев, 2000). Многочисленными исследованиями показано, что обогащение рациона фосфолипидами в значительной степени способствует усилению активности антиоксидантных систем организма, нормализации процесса транспорта липидов в кровотоке, репарации клеточных мембран, активации иммунокомпетентных клеток и усилению процесса всасывания жиров в кишечнике(Швец, Краснопольский, 1987; Подобед и др., 1995).

Особенную ценность представляют фосфолипиды из рыбного сырья, отличающиеся от растительных фосфолипидов значительным содержанием таких полиненасыщенных жирных кислот, как эйкозапентаеновая и докозагексаеновая (Болотова и др., 1988; Гордиенко, 1990; Боева и др., 1994; Шахман и др., 1994; Горелова и др., 1999; Лебская и др., 1999). Поэтому, вполне логично предположение об использовании фосфолипидов из рыбного сырья для профилактики и лечения многих заболеваний.

Для подтверждения этого и присвоения ⌠Рыбному жиру с фосфолипидами■ статуса БАД запланировано проведение клинической апробации продукта на базе Института питания РАМН.

Заключение

Создание композиций природных биологически активных пищевых добавок представляет собой актуальную проблему современной диетологии. Одной из эффективных форм таких БАД является ⌠Рыбий жир с фосфолипидами из морских гидробионтов■.

Экспериментально обоснованы условия перевода концентрата фосфолипидов в спирторастворимую форму, так как при обычных условиях этот продукт, обладающий вязкой консистенцией, не растворяется в рыбном жире. Показано, что оптимальным временем перевода концентрата фосфолипидов в спирторастворимую форму является 3,5 часа при соотношении продукт : спирт √ 1 : 10 и температуре 20°С.

Спиртовый экстракт фосфолипидов при растворении в рыбном жире в соотношении масс 15 √ 85 %, соответственно, и температуре 20°С образует продукт однородной прозрачной консистенции. Предполагается, что новая пищевая добавка будет эффективнее по сравнению с рыбным жиром и концентратом фосфолипидов, так как сочетает в себе свойства этих двух известных физиологически активных составляющих.Очевидно, что новая БАД будет эффективна для профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний, повышения антиоксидантных возможностей организма и иммунного статуса. Однако, для подтверждения этого необходимо установление оптимальных концентраций ежедневного употребления продукта и проведение клинических исследований.

Список использованной литературы

Акулин В. Н., Леванидов И. П. Развитие исследований в области технологии использования рыб и нерыбных объектов Дальнего Востока. Проблемы дальневосточной рыбохозяйственной науки // М.: Агропромиздат. - 1985. - С. 101-115.

Акулин В.Н., Блинов Ю.Г. Исследования в области технологии использования рыб и нерыбных объектов Дальнего Востока // ТИНРО-70.- Владивосток.-1995. - С.32-51.

Арчаков А.И., Ипатова О.М., Прозоровский В.Н. Растительные фосфолипиды:применение в профилактике сердечнро-сосудистых и печеночных заболеваний//Материалы 1У Междунар. симпозиума ■Биологически активные добавки к пище: ХХ1 век.- ■.-Москва.-⌠VIP Publishing■-2000. -С.13-14.

Ашмарин И..П., Исаев В.А. ⌠Эйконол■ улучшает память, повышает интенсивность умственной деятельности// Материалы 1У Междунар.симпозиума ■Биологически активные добавки к пище: ХХ1 век.- ■.-Москва.-⌠VIP Publishing■-2000. - С.15-17.

Блинов Ю.Г., Шульгина Л.В. Использование добавок из морских объектов при изготовлении продуктов с заданными свойствами//Материалы 1У Междун.симпозиума ■Биологически активные добавки к пище:ХХ1 век.-М √ 2000 .- С.29.

Боева Н.П., Ржавская Ф.М., Балова О.А. и др. Разработка новых медицинских лечебно-профилактических препаратов и продуктов на основе рыбных жиров .//Междунар. конф. ■Технол. перераб. гидробионтов■, Москва, 27-30.10.1993.-М., 1994. - С.113-114.

Болотова Е.Н., Соловьев В.В., Озерова И.Н. и др. Влияние эссенциальных фосфолипидов на липидный спектр плазмы крови и агрегационную способность тромбоцитов у больных ишемической болезнью сердца//Кардиология √ 1988. - Т.53 - N5 - С.78-91.

Горелова Ж.Ю., Ладодо К.С., Левачев М.М. Роль полиненасыщенных жирных кислот в лечебном питании детей с аллергическими заболеваениями//Вопр.питания. - 1999. - N1 - С.31-35.

Гордиенко А .Д. Фармакологические и биохимические эффекты ненасыщенных жирных кислот в лечебном питании детей с аллергическими заболеваниями//Фармакология и токсикология. √ 1990.-Том 53. - N5. - С.78-91.

Гурин И. С., Ажгихин И. С. Биологически активные вещества гидробионтов - источник новых лекарств и препаратов // М. : 1981.- 134 с.

Кейтс М. Техника липидологии. Выделение, анализ и идентификация липидов//М.:Мир, 1975.- 322 с..

Кизеветтер И. В. Жиры морских млекопитающих// Владивосток.- 1953.- 103 с.

Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография.-Москва.:Мир.-1981.-Т.1.-616 с.

Лебская Т. К., Двинин Ю. Ф., Толкачева В. Ф. К вопросу использования гидробионтов Баренцева и Белого морей при разработке лечебно-профилактических препаратов// Медико-биологические аспекты разработки продуктов питания. - Тез. докл. - Киев. - 1993. - С. 47.

Лебская Т.К. Состояние и перспективы разработки лечебно-профилактических продуктов питания из морских гидробионтов прибрежной части Баренцева моря//Тезисы докладов НПК 17-18.04.1997.-Нетрадиционные объекты морского промысла и перспективы их использования.-Мурманск.-1997.-С.84-85.

Лебская Т.К., Двинин Ю. Ф., Константинова Л. Л., и др. Химический состав и биохимические свойства гидробионтов прибрежной зоны Баренцева и Белого морей// Мурманск: Изд-во ПИНРО. - 1998.- 185 с.

Лебская Т. К., Дубницкая Г. М., Байдалова Г.Ф. и др.Технология обогащения рыбных жиров биологически активными добавками из морских животных//Тезисы докл. НПК МГТУ, Юбилейная 10 конф. - Мурманск. - 1999.- С.415-416.

Лебская Т.К., Толкачева В.Ф., Варсанович Е.А. и др. Применение БАД ■Рыбий жир с каротиноидами из морского огурца■ в диетотерапии больных гипертониччччческой болезнью и ИБС с ожирением//Материалы 1У Международного симпозиума ■Биологически активные добавки к пище: ХХ1 век■.-Москва.-⌠VIP Publishing■-2000.-С.133-134.

Левачев М.М. Жиры рыб в диетотерапии гиперлипопротеидемий и гипертонии//Медицина и здравоохранение.Серия:Терапия.-М.:1988.-85с.

Маслова Г.В., Сподобина Л.А. Препараты лечебно-профилактического назначения на основе рыбных и растительных жиров//Научно-технический симпозиум ■Современные средства воспроизводства и использования водных биоресурсов■ Тезисы докл.-С-Петербург.- 7 Международная выставка Инрыбпром-2000. - С-Петербург.-2000. - С.59-60.

Орлова С. Энциклопедия биологически активных добавок к пище. М., 1998. - Т. 2. - 279 с. Пат. Р.Ф.N 2063242.-Заяв. N 93030669.-тр. 16.06.93.-опубл. 10.07.96. -Бюл. N 19. Способ получения фосфатидилхолина .-Лебская Т. К., Харзова Л. П., Похмельных Т. А.

Пат.РФ N 2129809 С 1,24.04.98 ⌠Способ получения пищевого продукта в капсулах■.- Захарчук А.В., Гневушев Е.Г., Арутюнян А.А.

Поздняковская В.В., Спиричев И.Б. Проблема дефицита эссенциальных факторов питания. Пути коррекции//Труды Междун. науч. конф. 27-29 сентября 1999 г. ■Рыбохозяйственные исследования мирового океана■. - Владивосток. - 1999. - С.48.

Поздняковская В.В., Чечерин В.В. Технологические и гигиенические аспекты создания морепродуктов диетического и лечебно-профилактического назначения// Труды Междун. науч. конф. 27-29 сентября 1999 г ■Рыбохозяйственные исследования мирового океана■. - Владивосток. - 1999.-С.49.

Подобед О. В., Федорова Л. М., Якушева И. В. и др. Влияние фосфатидилхолина на репарационные процессы в клетках печени при ее остром повреждении //Вопросы медицинской химии.- 1995.- Т. 41.- N 1.- С. 13-16.

Поздняковский В.М., Австриевских А.Н. Использование ресурсов мирового океана в качестве источника биологически активных веществ// Труды Междун.науч.конф. 27-29 сентября 1999 г. ■Рыбохозяйственные исследования мирового океана■. - Владивосток. - 1999. - С.50.

Рамбеза Е. Ф., Байдалинова Л. С. Новое направление в обогащении рыбных жиров//Новые направления исследований в области традиционных технологий переработки рыбы: Сб. науч. тр.- Т. 2- Калининград. - 1996.- С. 47-54.

Ржавская Ф.М. Жиры рыб и морских млекопитающих. - М.:Пищевая промышленность.- 1976.- 470 с.

Скулачев В.П. Феноптоз: запрограмированная смерть организма//Биохимия - 1999. - Т.64.-вып.12. - С.1679-1688.

Тутельян В.А. Стратегия развития, применения и оценки эффективности биологически активных добавок к пище//Вопросы питания.-1996. - N6. - С.3-11.

Тутельян В.А., Васильев А.В. Эволюционная биохимия как теоретическая база создания новых БАД//Материалы 1У Международного симпозиума ■Биологически активные добавки к пище:ХХI век■.-Москва.-⌠VIP Publishing■ - 2000.-С.3-4.

Тютюнников Б.Н. Химия жиров. - М.:Пищ. промыш., 1974. - 448 с.

Шахман A.В., Даценко З.М., Шумейко В.Н. Антиоксидантное действие фосфолипидного комплекса, выделеного из морских организмов//Укр. биохим. журнал. - 1994. - N 4. - С. 87-95.

Швец В.И., Краснопольский Ю.М. Липиды в лекарственных препаратах//Хим.-фарм.- 1987.-N1.-С.17-26.

Fusetani N. Potential drugs from marine foods// Shokuhin Koguo. √ 1990 - Vol.33. - P.22-27.

Fusetani N. Marine organisms as biochemical resources for the development of unutilized resources/ In ⌠Fronfier

Researches in Fisheries Science■ ed. H. Reijro.-Kouuseisha-Kouseikaku,Tokyo. - 1994 -107 p.
Источник информации : http://www.mstu.edu.ru

© InterNevod
Designed by WebSkate
Powered by Norma-Press
Основные функциональные модули проекта Торговая система Рыбная баннерная система БД предприятий рыбной отрасли
  Flash-презентация